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環(huán)氧化合物與陽離子聚合物及它們的制備方法

專利號
CN103087012B
公開日期
2014-10-22
申請人
四川大學(xué)(四川省成都市武侯區(qū)一環(huán)路南一段24號)
發(fā)明人
余孝其; 張琴芳; 張驥
IPC分類
C07D303/27; C07D301/28; C08G59/50; C08G59/28
技術(shù)領(lǐng)域
質(zhì)粒,pegfp,轉(zhuǎn)染,細(xì)胞,復(fù)合物,陽離子,2os,基因,聚合物,培養(yǎng)
地域: 四川省 四川省成都市

摘要

本發(fā)明公開的環(huán)氧化合物與由其開環(huán)聚合得到的陽離子聚合物的結(jié)構(gòu)式或結(jié)構(gòu)通式如下:或本發(fā)明還公開了它們的制備方法。本發(fā)明提供的陽離子聚合物能夠在生理條件下與帶負(fù)電的DNA靜電結(jié)合形成適合于基因轉(zhuǎn)染的納米尺寸和電位的復(fù)合物顆粒,不僅可促進(jìn)復(fù)合物通過內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,且細(xì)胞毒性低,在有、無血清條件下其轉(zhuǎn)染效率均較高,使其具有臨床應(yīng)用的潛能,同時還表現(xiàn)出了一定的細(xì)胞選擇性,可為臨床的靶向治療提供可能性。其制備方法簡單、成熟,易于掌握控制。

說明書

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[0044] 圖6為本發(fā)明實施例5、6、7和8所制備的陽離子聚合物P1、P2、P3和P4與pEGFP-N1質(zhì)粒DNA形成的轉(zhuǎn)染效率最佳質(zhì)量比(P1、P2、P3和P4分別與pEGFP質(zhì)粒的質(zhì)量比為2、6、6和2)的復(fù)合物、以及以bPEI 25KDa與pEGFP-N1質(zhì)粒DNA形成的質(zhì)量比為1.4(因該質(zhì)量比表現(xiàn)出了最佳轉(zhuǎn)染效率)的復(fù)合物為陽性對照樣在U-2OS細(xì)胞中無血清條件下的轉(zhuǎn)染實驗照片。 [0045] 圖7為本發(fā)明實施例6和8所制備的陽離子聚合物P2、P4與pGL-3質(zhì)粒DNA形成的不同質(zhì)量比的復(fù)合物、以及以bPEI 25KDa與pGL-3質(zhì)粒DNA形成的質(zhì)量比為1.4(因該質(zhì)量比表現(xiàn)出了最佳轉(zhuǎn)染效率)的復(fù)合物為陽性對照樣在U-2OS細(xì)胞中有血清條件下的定量轉(zhuǎn)染結(jié)果圖。 [0046] 圖8為本發(fā)明實施例6和8所制備的陽離子聚合物P2和P4與pEGFP-N1質(zhì)粒形成的最佳質(zhì)量比(P2與pEGFP質(zhì)粒的質(zhì)量比為3,P4與pEGFP質(zhì)粒的質(zhì)量比為2)的復(fù)合物在U-2OS細(xì)胞中有血清條件下的轉(zhuǎn)染照片,同時以bPEI 25KDa與pEGFP-N1質(zhì)粒DNA形成的質(zhì)量比為1.4(因該質(zhì)量比表現(xiàn)出了最佳轉(zhuǎn)染效率)的復(fù)合物為陽性對照。 [0047] 圖9為本發(fā)明實施例8所制備的陽離子聚合物P4與 pGL-3質(zhì)粒DNA形成的不同質(zhì)量比的復(fù)合物、以及以bPEI 25KDa與pGL-3質(zhì)粒DNA形成的質(zhì)量比為1.4(因該質(zhì)量比表現(xiàn)出了最佳轉(zhuǎn)染效率)的復(fù)合物為陽性對照樣在U-2OS、A549和293T細(xì)胞中有血清條件下的定量轉(zhuǎn)染結(jié)果圖。 [0048] 圖10為本發(fā)明實施例8所制備的陽離子聚合物P4與pEGFP-N1質(zhì)粒形成的最佳質(zhì)量比2、6、4的復(fù)合物分別對應(yīng)在U-2OS細(xì)胞、A549細(xì)胞和293T細(xì)胞中有血清條件下的轉(zhuǎn)染照片,同時以bPEI 25KDa與pEGFP-N1質(zhì)粒DNA形成的質(zhì)量比為1.4(因該質(zhì)量比也表現(xiàn)出了最佳轉(zhuǎn)染效率)的復(fù)合物為陽性對照樣。 具體實施方式 [0049] 下面給出實施例以對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述,但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實施例,凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容的技術(shù)方案均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 [0050] 值得說明的是,1)以下實施例1~4的步驟(2)中所用的氫氧化鈉為片狀的。2)以下實施例1~4的步驟(1)和(2)中柱層析分離采用300~400目的硅膠柱,步驟(1)洗脫劑為體積比1∶30的甲醇與二氯甲烷溶液;步驟(2)中洗脫劑為體積比1∶4的乙酸乙酯與石油醚溶液。3)以下實施例5~8中分別用下述a、b、c或d二胺時,其對應(yīng)所得的陽離子聚合物就定義為P1、P2、P3、P4: [0051] [0052] 實施例1 [0053] (1)將0.02mmol(2.96g)N,N’-二羥乙基乙二胺和0.048mmol (4.84g)三乙胺加入100mL二氯甲烷中,并于冰水浴內(nèi)攪拌至其完全溶解,然后將完全溶解在50mL二氯甲烷中的0.044mmol(8.72g)二碳酸二叔丁酯以3s/滴的速度滴加,滴加完畢后,室溫反應(yīng) 12h,減壓蒸餾,再依次用乙酸乙酯重結(jié)晶和柱分離即得純白色如下結(jié)構(gòu)的中間化合物N,N’-2Boc-N,N’-二羥乙基乙二胺3.56g,收率51%: [0054] [0055] 1H NMR (400 MHz, DMSO, TMS): δ = 1.39 (s, 18H, -Boc), 3.18 (m, J = 4 Hz, 4H, -CH2CH2OH), 3.29 (m, J = 12Hz, 4H, -CH2CH2-), 3.45 (m, J = 4 Hz, 4H, -CH2CH2OH), 4.66 (S,2H, -OH)。 [0056] 13C NMR (DMSO , 100 MHz): δ 28.02, 49.93, 55.99, 58.95, 78.38, 154.55。 [0057] HR-MS (ESI):Calcd for: C16H32N2O6: 371.2158[M+Na]+; Found: + 371.2156[M+Na] ; [0058] (2)在室溫下,將10 mmol(3.5g)N,N’-2Boc-N,N’-二羥乙基乙二胺、30mmol(2.8g)環(huán)氧氯丙烷、30mmol(1.2g)氫氧化鈉、0.75mmol(241mg)四丁基溴化銨、50ml二氯甲烷和1mmol(18mg)水一起進(jìn)行攪拌混合,待固體物質(zhì)基本溶解后加熱至35℃反應(yīng)4h,冷卻至室溫,抽濾,再用二氯甲烷洗滌濾餅并抽濾,合并濾液減壓蒸餾,并用體積比為 2∶1石油醚與乙酸乙酯組成的洗脫劑通過柱層析分離即可得到無色油狀如下結(jié)構(gòu)的環(huán)氧化合物1.38g,收率30%: [0059]

權(quán)利要求

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