環(huán)氧化合物與陽(yáng)離子聚合物及它們的制備方法
地域：
四川省
四川省成都市
摘要
本發(fā)明公開的環(huán)氧化合物與由其開環(huán)聚合得到的陽(yáng)離子聚合物的結(jié)構(gòu)式或結(jié)構(gòu)通式如下：或本發(fā)明還公開了它們的制備方法。本發(fā)明提供的陽(yáng)離子聚合物能夠在生理?xiàng)l件下與帶負(fù)電的DNA靜電結(jié)合形成適合于基因轉(zhuǎn)染的納米尺寸和電位的復(fù)合物顆粒，不僅可促進(jìn)復(fù)合物通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞，且細(xì)胞毒性低，在有、無(wú)血清條件下其轉(zhuǎn)染效率均較高，使其具有臨床應(yīng)用的潛能，同時(shí)還表現(xiàn)出了一定的細(xì)胞選擇性，可為臨床的靶向治療提供可能性。其制備方法簡(jiǎn)單、成熟，易于掌握控制。
說(shuō)明書
[0093] （1）在室溫常壓下將100 mL無(wú)水乙醇、3.6g（0.024mol）三乙烯四胺加入反應(yīng)容器中進(jìn)行攪拌混合并置于冰水浴中,然后將9.5g（0.049mol）1-叔丁氧羰基苯酚（合成方法參照Kozo Nakamura, Takero Nakajima, Hiroshi Kayahara, Eisaku Nomura And Hisaji Taniguchi, Tetrahedron Letters 45 （2004） 495–499）溶解在20 mL無(wú)水乙醇中,再滴加到反應(yīng)器中,滴加完后加熱至回流反應(yīng)12h,反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾,然后加入60mL冰水,在冰水浴下用檸檬酸（2N）調(diào)節(jié)pH至3,用30mL二氯甲烷洗滌5次,收集水相,用氫氧化鈉溶液（1N）調(diào)節(jié)pH=14,用60mL二氯甲烷萃取5次,收集有機(jī)相,用無(wú)水硫酸鈉干燥
10h,減壓蒸餾,用甲醇、二氯甲烷組成的洗脫劑（先用甲醇與二氯甲烷的體積比為1∶20洗脫,再換成甲醇洗脫）進(jìn)行柱層析分離,然后減壓蒸餾、放入真空干燥箱中干燥即得到以下結(jié)構(gòu)的無(wú)色油狀化合物d 2.4g,收率20%。
[0094]
[0095] 1H NMR （400 MHz, CDCl3, TMS）: δ = 1.45 （s, 18H, -Boc）, 2.73 （m, J =
4Hz, 8H, BocNHCH2CH2NHCH2-）, 3.22 （d, 4H, BocNHCH2CH2NHCH2-）。
[0096] 13C NMR （CDCl3 , 100 MHz）: δ 28.40, 40.24, 48.75, 49.04, 79.13,
156.20。
[0097] HR-MS （ESI）:Calcd for: C16H34N4O4: 347.2658[M+H]+； Found: 347.2659 [M+H]+。
[0098] （2） 在室溫下,將實(shí)施例1制備的1.211mmol（557.6mg）環(huán)氧化合物、本實(shí)施例制備的1.211mmol（419.7 mg）化合物d加入605μL無(wú)水乙醇中攪拌溶解,其中環(huán)氧化合物的濃度為2mmol/mL,然后N2氛圍下于80℃反應(yīng)70h,停止加熱,繼續(xù)攪拌冷卻至室溫；將HCl氣體通入上述反應(yīng)物中攪拌24h,減壓蒸餾除去無(wú)水乙醇；先將所得白色固體用10mL去離子水溶解后置于冰水浴中,然后用1N的氫氧化鈉溶液將其pH調(diào)至14,再用截留分子量為3500的透析袋透析4d,凍干即得如下結(jié)構(gòu)聚合物P4 163mg,收率33%：
[0099] （n=34）
[0100] 1H NMR （400 MHz, D2O, TMS）: δ = 2.49~2.74 （m, 20H, -CH2CH2NH2、-NCH2CH2N-、-CH2CHOHCH2O-、-OCH2CH2NHCH2-）, 3.36~3.61 （m, 12H, -CH2CHOHCH2O-、-OCH2CH2NHCH2-）,
3.87 （m, 2H, -CH2CHOHCH2O-）。
[0101] GPC: Mw=14 KDa, PDI=1.84
[0102] 應(yīng)用例1
[0103] 將實(shí)施例5~8所制備的陽(yáng)離子聚合物分別溶于磷酸鹽緩沖液（簡(jiǎn)稱PBS,濃度為
1×）使其濃度為2mg/mL,然后用220nm的除菌濾頭過(guò)濾后放入冰箱待用。將pEGFP-N1質(zhì)粒溶于PBS（1×）使其濃度為0.2mg/mL待用。將所配置的陽(yáng)離子聚合物溶液與pEGFP-N1質(zhì)粒溶液按質(zhì)量比為0.25、0.5、1、2、4、6、8分別混合均勻,再用PBS（1×）稀釋分別使pEGFP-N1質(zhì)粒的濃度為0.05mg/mL,于37℃孵化0.5h得陽(yáng)離子聚合物與pEGFP-N1質(zhì)粒復(fù)合物。
[0104] 應(yīng)用例2
[0105] 將實(shí)施例5~8所制備的陽(yáng)離子聚合物分別溶于PBS（1×）使其濃度為2mg/mL,然后用220nm的除菌濾頭過(guò)濾后放入冰箱待用。將PGL-3質(zhì)粒溶于PBS（1×）使其濃度為
0.2mg/mL待用。將所配置的陽(yáng)離子聚合物溶液與PGL-3質(zhì)粒溶液按質(zhì)量比為0.25、0.5、1、
2、4、6、8分別混合均勻,然后用PBS（1×）稀釋分別使PGL-3質(zhì)粒的濃度為0.05mg/mL,再于37℃孵化0.5h得陽(yáng)離子聚合物與PGL-3質(zhì)粒復(fù)合物。
[0106] 應(yīng)用例3
[0107] 將實(shí)施例5~8所制備的陽(yáng)離子聚合物分別溶于PBS（1×）使其濃度為2mg/mL,然后用220nm的除菌濾頭過(guò)濾后放入冰箱待用。將pUC19質(zhì)粒質(zhì)粒溶于PBS（1×）使其濃度為0.2mg/mL待用。將所配置的陽(yáng)離子聚合物溶液與pUC19質(zhì)粒質(zhì)粒溶液按質(zhì)量比為0.25、
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