一種基于納米銀及納米銅聯(lián)合構(gòu)建的雙通道乳腺癌易感基 因傳感器的制備方法及應(yīng)用 技術(shù)領(lǐng)域 [0001] 本發(fā)明一種基于納米銀及納米銅聯(lián)合構(gòu)建的雙通道乳腺癌易感基因傳感器的制備方法及應(yīng)用。具體是采用簡單方法制備的納米銀及納米銅，制備一種同步檢測乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2的電化學(xué)免疫傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測技術(shù)領(lǐng)域。 背景技術(shù) [0002] 乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，中國近年來乳腺癌發(fā)病率高居女性惡性腫瘤的首位，但其發(fā)病機制目前尚不清楚，主要歸納為遺傳易感性、內(nèi)分泌失調(diào)、通過哺乳傳染病毒顆粒等。研究者認為大約5%的乳腺癌是由于基因突變引起的，其中腫瘤抑制基因乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2與乳腺癌發(fā)病的關(guān)系較為密切。通過對乳腺癌易感基因1的檢測，可以反映乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，也可篩檢出乳腺癌、卵巢癌及其他相關(guān)惡性腫瘤的高危人群，利于該類疾病的早期診斷治療；通過對乳腺癌易感基因2檢測，可以早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌及其他幾種惡性腫瘤，如前列腺癌、卵巢癌等，并可選擇合理有效的治療方案。 [0003] 電化學(xué)免疫傳感器具有選擇性好，靈敏度高，檢測限低，適合聯(lián)機化，操作簡便等優(yōu)點，可實現(xiàn)在線電化學(xué)檢測，樣品預(yù)處理簡單或不需預(yù)處理，檢測不受樣品物理性質(zhì)的影響，所需儀器設(shè)備相對簡單，具有簡便、快速、體積小等特點，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于腫瘤標志物的檢測。 [0004] 因此本發(fā)明制備了一種基于簡單方法制備的納米銀和納米銅聯(lián)合標記的雙通道電化學(xué)免疫傳感器，實現(xiàn)了對乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2的同步檢測。首先，納米銀及納米銅的制備方法簡單，簡化了制備步驟和操作程序；其次，納米銀及納米銅都具有良好的生物相容性，能夠和檢測抗體有效鍵合；最后，納米銀和納米銅能夠在電極表面發(fā)生氧化還原作用，產(chǎn)生具有不同峰位的峰電流，分別為乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2提供電化學(xué)信號。該方法具有成本低、靈敏度高、特異性好、快速同步檢測等優(yōu)點，而且制備過程較為簡單，為有效預(yù)警乳腺癌提供了新方法。 發(fā)明內(nèi)容 [0005] 本發(fā)明的目的之一是基于簡單方法制備的納米銀和納米銅，構(gòu)建了一種無酶、快速且超靈敏的雙通道夾心型電化學(xué)免疫傳感器。 [0006] 本發(fā)明的目的之二是將該雙通道夾心型電化學(xué)免疫傳感器應(yīng)用于乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2的檢測。 [0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： [0008] 1. 一種基于納米銀及納米銅聯(lián)合構(gòu)建的雙通道乳腺癌易感基因傳感器的制備方法 [0009] （1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化鋁粉末對玻碳電極進行拋光，分別在超純水和乙醇中超聲清洗，氮氣吹干； [0010] （2）在電極表面滴加6 μL濃度為1 ~ 2 mg/mL的金納米粒子水溶液，干燥； [0011] （3）繼續(xù)將6 μL濃度為8 ~ 12 μg/mL的乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2的捕獲抗體溶液滴加到修飾電極表面，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干凈； [0012] （4）用3 μL濃度為5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干凈； [0013] （5）將6 μL濃度為0.000001~ 20 ng/mL的一系列不同濃度的乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2用于和對應(yīng)的捕獲抗體的特異性識別，室溫下孵化1 h，清洗干凈； [0014] （6）將6 μL制備好的納米銀標記的乳腺癌易感基因1的檢測抗體溶液和納米銅標記的乳腺癌易感基因2的檢測抗體溶液滴在電極上與對應(yīng)的乳腺癌易感基因進行特異性識別，室溫下孵化1 h，清洗干凈，于4℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩? [0015] 2. 納米銀標記的乳腺癌易感基因1的檢測抗體溶液和納米銅標記的乳腺癌易感基因2的檢測抗體溶液的制備 [0016] （1）納米銀標記的乳腺癌易感基因1的檢測抗體溶液的制備 [0017] 在室溫下，向100 mL冰水中加入5 ~ 10 mg硼氫化鈉，待其溶解后，在攪拌下向冰水中逐漸滴加3.4 ~ 6.8 mg硝酸銀溶液，觀察得到金黃色透明的溶液，繼續(xù)攪拌1 h后，即可得到濃度約為0.2 ~ 0.4 mM分散均勻的納米銀溶液，取10 ~ 20 mL該納米銀溶液與1 mL濃度為10 ~ 20 μg/mL乳腺癌易感基因1的檢測抗體混合，震蕩12 h，離心洗滌后分散在1 mL超純水中，制得納米銀標記的乳腺癌易感基因1的檢測抗體溶液，于4℃冰箱中儲存?zhèn)溆茫? [0018] （2）納米銅標記的乳腺癌易感基因2的檢測抗體溶液的制備

1.一種基于納米銀及納米銅聯(lián)合構(gòu)建的雙通道乳腺癌易感基因傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： （1）納米銀標記的乳腺癌易感基因1的檢測抗體溶液的制備 在室溫下，向100 mL冰水中加入5 ~ 10 mg硼氫化鈉，待其溶解后，在攪拌下向冰水中逐漸滴加3.4 ~ 6.8 mg硝酸銀溶液，觀察得到金黃色透明的溶液，繼續(xù)攪拌1 h后，即可得到濃度約為0.2 ~ 0.4 mM分散均勻的納米銀溶液，取10 ~ 20 mL該納米銀溶液與1 mL濃度為10 ~ 20 μg/mL乳腺癌易感基因1的檢測抗體混合，震蕩12 h，離心洗滌后分散在 1 mL超純水中，制得納米銀標記的乳腺癌易感基因1的檢測抗體溶液，于4℃冰箱中儲存?zhèn)溆茫? （2）納米銅標記的乳腺癌易感基因2的檢測抗體溶液的制備 將10 ~ 20 mL濃度為0.3 mol/L的多巴胺水溶液在磁力攪拌下加熱到80℃，隨后，向該溶液中逐漸滴加10 ~ 20 mL濃度為0.1 mol/L的氯化銅溶液，加熱6 h，得到黑色溶液，即為納米銅溶液，取10 ~ 20 mL該納米銅溶液與1 mL濃度為10 ~ 20 μg/mL乳腺癌易感基因2的檢測抗體混合，震蕩12 h，離心洗滌后分散在1 mL超純水中，制得納米銅標記的乳腺癌易感基因2的檢測抗體溶液，于4℃冰箱中儲存?zhèn)溆茫? （3）傳感器的制備 1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化鋁粉末對玻碳電極進行拋光，分別在超純水和乙醇中超聲清洗，氮氣吹干； 2）在電極表面滴加6 μL濃度為1 ~ 2 mg/mL的金納米粒子水溶液，干燥； 3）繼續(xù)將6 μL濃度為8 ~ 12 μg/mL的乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2的捕獲抗體溶液滴加到修飾電極表面，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干凈； 4）用3 μL濃度為5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干凈； 5）將6 μL濃度為0.000001~ 20 ng/mL的一系列不同濃度的乳腺癌易感基因1和乳腺癌易感基因2用于和對應(yīng)的捕獲抗體的特異性識別，室溫下孵化1 h，清洗干凈； 6）將6 μL制備好的納米銀標記的乳腺癌易感基因1的檢測抗體溶液和納米銅標記的乳腺癌易感基因2的檢測抗體溶液滴在電極上與對應(yīng)的乳腺癌易感基因進行特異性識別，室溫下孵化1 h，清洗干凈，于4℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩?/div>