一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒及其制備方法和應(yīng)用 技術(shù)領(lǐng)域 [0001] 本發(fā)明涉及生化試劑測定技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒，還涉及所述谷胱甘肽還原酶測定試劑盒的制備方法和應(yīng)用。 背景技術(shù) [0002] 谷胱甘肽還原酶(GR)是一種黃素酶，每分子酶蛋白含有一分子的FAD。由輔酶NADPH供氫，催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)，還原成還原型谷胱甘肽(GSH)。還原型谷胱甘肽(GSH)可使含巰基(-SH)的酶處于還原狀態(tài)及活性狀態(tài)，維持紅細胞膜的完整性，防止血紅蛋白氧化。GR在機體內(nèi)活性強弱，依次為肝、腎、胰、心、甲狀腺、紅細胞和血漿。GR定位于微粒體及細胞液部分。因各臟器的組織細胞普遍含有GR，因而GR在機體氧化還原反應(yīng)中起了舉足輕重的地位。 [0003] 在正常機體代謝過程中，機體存在有效的抗氧化防御系統(tǒng)，不斷產(chǎn)生的氧自由基在抗氧化系統(tǒng)的作用下不斷地被清除，從而維持生理水平的濃度?？寡趸到y(tǒng)包括細胞內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)和非酶性的抗氧化劑，其中最主要的是谷胱甘肽抗氧化物酶系統(tǒng)。谷胱甘肽抗氧化物酶系統(tǒng)主要包括谷胱甘肽(GSH)，谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)，谷胱甘肽還原酶(GR)，谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST)。谷胱甘肽是人類細胞中自然合成的，主要在肝內(nèi)合成，由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸組成的小分子三肽化合物，是細胞內(nèi)主要的非蛋白質(zhì)巰基化合物。在細胞內(nèi)正常環(huán)境下以硫醇還原性(GSH)存在，還原型是其主要的活性狀態(tài)，大約占 95％；氧化型谷胱甘肽(GSSG)是非活性狀態(tài)，約占1％。內(nèi)源性GSH主要存在于胞漿內(nèi)，由γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶催化合成。GSH含有的巰基是其發(fā)揮主要作用的基團。在許多生命活動包括基因表達調(diào)控、酶活性和代謝調(diào)節(jié)、對細胞的保護、氨基酸轉(zhuǎn)運、免疫功能調(diào)節(jié)等起著直接或間接的作用。氧化應(yīng)激或親電化合物攻擊可使細胞內(nèi)GSH含量下降，或使其轉(zhuǎn)變?yōu)殡p硫氧化性(GSSG)。GR是一種黃素蛋白氧化還原酶，以還原性輔酶Ⅱ為供氫體，能催化GSSG還原成GSH，對于維持生物體GSH和GSSG比的穩(wěn)定、保持體內(nèi)氧自由基平衡起著重要作用。GPX可以特異的催化GSH對過氧化氫的還原反應(yīng)，起到保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用，而且能夠使脂質(zhì)過氧化物變成無毒的羥化物。GST在GPX活力低下的條件下，具有清除體內(nèi)氧自由基的功能，同時能使有害的親電物質(zhì)與GSH結(jié)合，將其排出體外，從而起到保護體內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸等的功能。 [0004] 目前國內(nèi)測定谷胱甘肽還原酶的方法主要有Elisa法和紫外酶法，前者需要手工操作，耗時較長，步驟比較繁瑣，價格不菲。目前國內(nèi)主要推廣的方法是紫外酶法，但現(xiàn)有的紫外酶法谷胱甘肽還原酶的試劑盒主要為進口干粉試劑，雖然結(jié)果準確，但是價格不菲，使用前需要復(fù)溶，操作不方便。復(fù)溶后需要盡快使用，使用非常不方便并且復(fù)溶后使用不完會出現(xiàn)大量的浪費。而臨床生化分析儀上最方便使用的國產(chǎn)液體雙試劑目前存在穩(wěn)定性差，抗干擾能力差等缺點。 發(fā)明內(nèi)容 [0005] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒及其制備方法和應(yīng)用，該試劑盒是一種穩(wěn)定性強，抗干擾能力強的液體試劑盒。 [0006] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的： [0007] 一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒，試劑盒含有試劑R1和試劑R2； [0008] 試劑R1中含有以下成分：Tris緩沖液50-200mmol/L、EDTA?0.5-2mmol/L、丙酮酸羧化酶1-5KU/L、抗壞血酸氧化酶1-5KU/L、亞鐵氰化鉀5-20mg/L、表面活性劑1-5ml/L、防腐劑 0.5-2g/L； [0009] 試劑R2中含有以下成分：Tris緩沖液50-200mmol/L、EDTA?0.5-2mmol/L、GSSG2- 10mmol/L、NADPH?0.1-0.5mmol/L、穩(wěn)定劑1-15g/L、防腐劑0.5-2g/L。 [0010] 優(yōu)選地，試劑R1的pH值為6.5-7.5；試劑R2的pH值為9.0-10.0。 [0011] 優(yōu)選地，試劑R1中所述的表面活性劑為吐溫20、TritonX-100、TritonX-405、十二烷基硫酸鈉和Brij35中的一種或多種。 [0012] 優(yōu)選地，試劑R2中所述的穩(wěn)定劑為可溶性淀粉、海藻糖、甘油的混合物，可溶性淀粉、海藻糖、甘油的質(zhì)量比2：1-3:6-10。 [0013] 優(yōu)選地，試劑R1中所述的防腐劑為疊氮鈉、PC300、MIT和硫酸慶大霉素中的一種或多種。 [0014] 優(yōu)選地，試劑R2中所述的防腐劑為疊氮鈉、PC300、MIT和硫酸慶大霉素中的一種或多種。 [0015] 優(yōu)選地，所述試劑R1與試劑R2的體積比為1～5:1。 [0016] 更優(yōu)選地，所述試劑R1與試劑R2的體積比為4:1。 [0017] 上述所述的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1.一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒，其特征在于，試劑盒含有試劑R1和試劑R2； 試劑R1中含有以下成分：?Tris緩沖液50-200mmol/L、EDTA?0.5-2mmol/L、丙酮酸羧化酶1-5KU/L、抗壞血酸氧化酶1-5KU/L、亞鐵氰化鉀5-20mg/L、表面活性劑?1-5ml/L、防腐劑 0.5-2g/L； 試劑R2中含有以下成分：Tris緩沖液50-200mmol/L、EDTA?0.5-2mmol/L、GSSG?2- 10mmol/L、NADPH?0.1-0.5?mmol/L、穩(wěn)定劑1-15g/L、防腐劑0.5-2g/L； 試劑R2中所述的穩(wěn)定劑為可溶性淀粉、海藻糖、甘油的混合物，可溶性淀粉、海藻糖、甘油的質(zhì)量比?2：1-3:6-10； 試劑R1的pH?值為?6.5-7.5；試劑R2的pH?值為?9.0-10.0。 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒，其特征在于，試劑R1中所述的表面活性劑為吐溫20、TritonX-100、TritonX-405、十二烷基硫酸鈉和Brij35中的一種或多種。 3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒，其特征在于，試劑R1中所述的防腐劑為疊氮鈉、PC300?、MIT和硫酸慶大霉素中的一種或多種。 4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒，其特征在于，試劑R2中所述的防腐劑為疊氮鈉、PC300?、MIT和硫酸慶大霉素中的一種或多種。 5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒，其特征在于，所述試劑R1與試劑R2的體積比為?1 5:1。 ~ 6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒，其特征在于，所述試劑R1與試劑R2的體積比為?4:1。 7.一種權(quán)利要求1-6之一所述的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： （1）試劑?R1的配制：取適量水，分別依次加入R1中所示原料，攪勻溶解一個原料后加入下一個原料，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)到pH值6.5-7.5，定容到所需體積； （2）試劑R2的配制：取適量水，分別依次加入R2中所示原料，攪勻溶解一個原料后加入下一個原料，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)到pH值9.0-10.0，定容到所需體積。 8.一種權(quán)利要求1-6之一所述的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒的應(yīng)用，用于非疾病的診斷和治療目的測定血清中谷胱甘肽還原酶的濃度。