[0035] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中,步驟(a)中,所述脫乙酰殼多糖的平均分子量為537?
18000Da在一些實(shí)施例中,所述脫乙酰殼多糖的平均分子量可以為550Da、600Da、650Da、
800Da、900Da、1000Da、1200Da、1500Da、2000Da、2500Da、3000Da、3500Da、4000Da、4500Da、
5000Da、6000Da、8000Da、9000Da、10000Da或其中任意二個(gè)數(shù)值之間的范圍,例如1000?
10000Da,1000?5000Da,或1000?3000Da。
[0036] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中,步驟(a)中使用的脫乙酰殼多糖通過(guò)包括如下步驟的制備方法獲得:a1、將甲殼素水解,得到脫乙?;a(chǎn)物;a2、將所述脫乙酰化產(chǎn)物進(jìn)行氧化降解,得到所述脫乙酰殼多糖。
[0037] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中,步驟a1中,水解條件包括將甲殼素溶解于酸性溶液,然后加堿例如(氫氧化鈉溶液)調(diào)節(jié)到堿性(例如pH至8?10)。酸性溶液可以是鹽酸或醋酸溶液,pH優(yōu)選在0?4之間。
[0038] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中,步驟a1中,所述甲殼素與酸性溶液的固液比為1:5?
100。
[0039] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中,所述脫乙酰殼多糖的制備包括:將甲殼素溶于酸性溶液(鹽酸、醋酸)中,溶液pH在0?4之間,所述甲克素與酸性溶液的固液比為1:5?100;上述甲殼素的酸性溶液中加入氫氧化鈉溶液(20?60%),調(diào)節(jié)pH至8?10,得沉淀1;將所得沉淀1,通過(guò)壓濾、水洗等步驟獲得沉淀2;將所得白色沉淀2加入反應(yīng)釜中,加入氫氧化鈉溶液,調(diào)節(jié)pH至8?9;再加入過(guò)氧化氫溶液;調(diào)節(jié)溫度至0?95℃,反應(yīng)0.5?24小時(shí),得懸浮液;將懸浮液通過(guò)離心,水洗,離心等步驟得沉淀3。
[0040] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中,所述脫乙酰殼多糖衍生物的制備包括:將脫乙酰殼多糖溶于水中,調(diào)節(jié)pH8?10;向其中加入甲氧基聚乙二醇環(huán)氧乙烷,調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度至0?95℃,反應(yīng)0.5?24小時(shí),得透明液體;使用酸性溶液調(diào)節(jié)透明液體的pH至2?4后,透析后(MW?
3000Da),經(jīng)冷凍干燥后得產(chǎn)物1;所述脫乙酰殼多糖與甲氧基聚乙二醇環(huán)氧乙烷的摩爾比為1:0.1?1;
[0041] 將氨基酸或者多肽溶于pH為2?6的PBS溶液(0.05M?1M)中,向其中加入EDC,NHS,0?
4℃活化0.1?4h,再向其中加入產(chǎn)物1,控制溫度反應(yīng)0?24h;反應(yīng)完成透析后(MW?3000Da),經(jīng)冷凍干燥后得產(chǎn)物2;其中氨基或者多肽與EDC和NHS的摩爾比為1:1 1.5。
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[0042] 本發(fā)明的實(shí)施方式中,脫乙酰殼多糖衍生物通過(guò)在殼多糖表面修飾羥乙基,從而增加其與皮膚角質(zhì)層中脂質(zhì)的相容性;通過(guò)在氨基上修飾氨基酸(如:精氨酸、組氨酸)增加其正電荷量,從而提高其電荷含量。
[0043] 在第二方面,本發(fā)明提供了如上所述的蛋白組合物的制備方法,其包括如下步驟:
將脫乙酰殼多糖衍生物溶于溶劑,得到溶液A;將蛋白溶于溶劑得到溶液B;將溶液A和溶液B進(jìn)行混合。
[0044] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式,所述溶劑為水。
[0045] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式,所述溶液A中脫乙酰殼多糖衍生物的質(zhì)量濃度0.001%?
50%,例如0.001%、0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2%、5%、8%、10%、15%、20%、25%、30%、
35%、40%或45%。
[0046] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式,所述溶液B中蛋白的質(zhì)量濃度為0.001%?50%,0.001%、
0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2%、5%、8%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%或45%。
[0047] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式,所述混合的條件包括:攪拌速度為10?2000?rpm,攪拌時(shí)間為0.1?48h。
[0048] 在第三方面,本發(fā)明還提供了一種護(hù)膚品,包括本發(fā)明第一方面所述的蛋白組合物。所述護(hù)膚品可以是水、乳、霜等。
[0049] 本發(fā)明提供的蛋白組合物可以有效地促進(jìn)蛋白的透皮吸收,在護(hù)膚品領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
附圖說(shuō)明
[0050] 圖1是實(shí)施例1制備的脫乙酰殼多糖衍生物的氫譜。
[0051] 圖2是實(shí)施例1制備的羥乙基脫乙酰殼多糖的氫譜。
[0052] 圖3是實(shí)施例1制備的脫乙酰殼多糖CS、羥乙基脫乙酰殼多糖QYJ?CS、脫乙酰殼多糖衍生物JAS?CS的紅外譜圖。
[0053] 圖4是應(yīng)用例1樣品動(dòng)物皮膚試驗(yàn)的熒光成像圖。
[0054] 圖5是圖4熒光成像結(jié)果的統(tǒng)計(jì)圖。
[0055] 圖6是應(yīng)用例2樣品動(dòng)物皮膚試驗(yàn)的熒光成像圖。
[0056] 圖7是圖6的熒光成像結(jié)果的統(tǒng)計(jì)圖。
具體實(shí)施方式