[0057] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白,以下結(jié)合實施例,對本發(fā)明進行進一步的詳細說明。此處所描述的具體實施例僅用于解釋本發(fā)明,并不用于構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。
[0058] 膠原蛋白是一類蛋白質(zhì)家族,已至少發(fā)現(xiàn)了30余種膠原蛋白鏈的編碼基因,可以形成16種以上的膠原蛋白分子,根據(jù)其結(jié)構(gòu),可以分為纖維膠原,基膜膠原、微纖維膠原、錨定膠原、六邊網(wǎng)狀膠原、非纖維膠原、跨膜膠原等。根據(jù)它們在體內(nèi)的分布和功能特點,可以將膠原分成間質(zhì)膠原、基底膜膠原和細胞外周膠原。間質(zhì)型膠原蛋白分子占整個機體膠原的絕大部分,包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原蛋白分子,Ⅰ型膠原蛋白主要分布于皮膚、肌腱等組織,也是水產(chǎn)品加工廢棄物(皮、骨和鱗)含量最多的蛋白質(zhì),占全部膠原蛋白含量的80% 90%左~
右,在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用最為廣泛。Ⅰ型膠原在魚類膠原中一個最顯著的的特點是熱穩(wěn)定性比較低,并呈現(xiàn)有魚種的特異性。Ⅱ型膠原蛋白由軟骨細胞產(chǎn)生;基底膜膠原蛋白通常是指Ⅳ型膠原蛋白,其主要分布于基底膜;細胞外周膠原蛋白通常中指Ⅴ型膠原蛋白,在結(jié)締組織中大量存在。按功能,可將膠原分為兩組,第一組是成纖維膠原,包括第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅺ、ⅩⅩⅣ和ⅩⅩⅦ型膠原;其余是第二組,非成纖維膠原。非成纖維膠原的α?鏈既含有三螺旋域(膠原域,COL),還含有非三螺旋域(非膠原域,NC),其中成纖維膠原約占膠原總數(shù)的90%。
[0059] 重組人源化膠原蛋白,由DNA重組技術(shù)制備的人膠原蛋白特定型別基因編碼的全長或部分氨基酸序列片段,或是含人膠原蛋白功能片段的組合。重組Ⅲ型人源化膠原蛋白是通過生物工程技術(shù)將人體膠原蛋白的mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,使用生物細胞的總?mRNA?為模板,用反轉(zhuǎn)錄酶合成互補的雙鏈?cDNA,然后嫁接接到載體上,轉(zhuǎn)入到宿主后建立的基因文庫就是?cDNA。
[0060] 纖連蛋白是高分子量糖蛋白,含糖4.5%-9.5%,其亞單位相對分子質(zhì)量為22萬-
25萬。各亞單位在C端形成二硫鍵交聯(lián)。纖連蛋白在再生修復(fù)肌膚表皮層、真皮層及皮下組織,抑制肌膚細菌,提高肌膚光澤度,改善肌膚粗糙度、提高角質(zhì)層含水量等方面有明顯的作用。
[0061] 實施例1脫乙酰殼多糖衍生物的合成:步驟一、取10克甲殼素溶于400ml?10%?鹽酸溶液中,調(diào)節(jié)pH為3,攪拌溶解后;加入50%NaOH水溶液,調(diào)節(jié)pH至8.5,得白色沉淀。將白色沉淀洗滌,壓濾后,倒入三口燒瓶中,再加入過氧化氫?30g和170mL水,調(diào)節(jié)溫度至80℃,反應(yīng)6小時,得乳白色液體,通過離心,水洗等步驟后得白色沉淀脫乙酰殼多糖(CS)。
[0062] 步驟二、將白色沉淀溶于100mL中,調(diào)節(jié)pH為9,然后加入0.1g甲氧基PEG?環(huán)氧乙烷,調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度至60℃,反應(yīng)6小時,然后使用10%?HCl溶液調(diào)節(jié)pH=4,經(jīng)透析(MW=
3000Da),冷凍干燥后得產(chǎn)物羥乙基殼多糖QYJ?CS?8.5g。
[0063] 步驟三、將精氨酸0.712g溶于pH=4.0?(0.1M)的緩沖溶液中,冰水浴(0℃)下,加入EDC?0.88g,?NHS?0.46g,冰浴下保持2h。再加入上步冷凍干燥物羥乙基殼多糖4g,室溫下反應(yīng)12h,經(jīng)透析(MW=3000Da),冷凍干燥后得最終產(chǎn)物脫乙酰殼多糖衍生物(精氨酸羥乙基殼多糖,簡稱JAS?CS)。
[0064] 圖1是步驟三的JAS?CS的1HNMR譜圖,圖2是步驟二的QYJ?CS的1HNMR譜圖,圖3示出了步驟一的脫乙酰殼多糖(CS)、以及步驟二的QYJ?CS和步驟三的JAS?CS紅外譜圖。
[0065] 通過動態(tài)光散射檢測發(fā)現(xiàn),本實施例中制備的脫乙酰殼多糖衍生物,其中納米顆粒粒徑為390±20nm,Zeta電勢為43mV。
[0066] 實施例2:取5g實施例1制備的脫乙酰殼多糖溶于100mL?水中,作為溶液A;取5g膠原蛋白溶于100mL水中,作為溶液B;室溫下,在200rpm攪拌下,將溶液B加入溶液A中,制備脫乙酰殼多糖/蛋白復(fù)合物;所得復(fù)合物經(jīng)過高溫滅菌后,可直接作為功效物用于護膚品中。
[0067] 實施例3:取1g脫乙酰殼多糖溶于100mL?水中,作為溶液A;取1g重組Ⅲ型人源化膠原蛋白溶于100mL水中,作為溶液B;室溫下,在200rpm攪拌下,將溶液B加入溶液A中,制備脫乙酰殼多糖/蛋白復(fù)合物;所得復(fù)合物經(jīng)過高溫滅菌后,可直接作為功效物用于護膚品中。
[0068] 實施例4:取0.1g脫乙酰殼多糖溶于100mL?水中,作為溶液A;取0.05g纖連蛋白溶于100mL水中,作為溶液B;室溫下,在200rpm攪拌下,將溶液B加入溶液A中,制備脫乙酰殼多糖/膠原蛋白復(fù)合物;所得復(fù)合物經(jīng)過高溫滅菌后,可直接作為功效物用于護膚品中。