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蛋白組合物及其制備方法和用途

專利號(hào)
CN115778845B
公開日期
2023-04-25
申請(qǐng)人
荷本世新(北京)生物科技有限公司; 安徽荷本生物科技有限公司(北京市大興區(qū)科苑路13號(hào)院1號(hào)樓4層402室)
發(fā)明人
張偉; 袁菊懋; 徐國金
IPC分類
A61K8/73; A61K8/65; A61K8/64; A61Q19/08; A61Q19/00
技術(shù)領(lǐng)域
殼多糖,膠原,蛋白,多糖,膠原蛋白,乙酰,氨酸,溶液,衍生物,衍生
地域: 北京市 北京市大興區(qū)

摘要

本發(fā)明涉及一種蛋白組合物及其制備方法和用途。該組合物包括脫乙酰殼多糖衍生物和蛋白,所述脫乙酰殼多糖衍生物包括:(1)脫乙酰殼多糖主鏈;(2)與所述主鏈通過醚鍵連接的基團(tuán)A;以及(3)與所述主鏈通過酰胺鍵連接的基團(tuán)B,其中,所述基團(tuán)A具有一個(gè)或多個(gè)羥乙基,所述基團(tuán)B具有一個(gè)或多個(gè)?;鸵粋€(gè)或多個(gè)氨基。本發(fā)明提供的蛋白組合物能較好地經(jīng)皮滲透,在護(hù)膚品領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景。

說明書

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[0069] 實(shí)施例5:取1g脫乙酰殼多糖衍生物溶于100mL?水中,作為溶液A;取1g重組Ⅲ型人源化膠原蛋白溶于100mL水中,作為溶液B;室溫下,在200rpm攪拌下,將溶液B加入溶液A中,制備脫乙酰殼多糖/蛋白復(fù)合物;所得復(fù)合物經(jīng)過高溫滅菌后,可直接作為功效物用于護(hù)膚品中。 [0070] 通過動(dòng)態(tài)光散射檢測(cè)發(fā)現(xiàn),本實(shí)施例中制備的脫乙酰殼多糖/蛋白復(fù)合物中,脫乙酰殼多糖衍生物和纖連蛋白形成的納米顆粒大小和Zeta電 勢(shì)見表1。 實(shí)施例6:1.將透明質(zhì)酸鈉0.1g,甘油50g,Sepimax?Zen?0.5g,卡波姆?0.5g,霍霍巴蠟?PEG?120?酯類?4g,PEG?20?甲基葡糖倍半硬脂酸酯?4g,對(duì)羥基苯乙酮?2g,去離子水 923.9g?,加熱至85℃,混合均質(zhì)后,制得混合物; [0071] 2.溫度降至45℃后,向上述溶液中加入實(shí)施例2、3、4或5制備的脫乙酰殼多糖/蛋白復(fù)合物,攪拌使其充分溶解; [0072] 3.再向上述溶液中加入1.2?戊二醇?10g,充分?jǐn)嚢?,得精華液a,降至室溫,出料、靜置。 [0073] 應(yīng)用例1:1、測(cè)試樣品制備 [0074] 配制含1%?CSNPs(實(shí)施例1制備的脫乙酰殼多糖衍生物)的5mL水溶液A。 [0075] 取1g?重組Ⅲ型人源化膠原蛋白溶于?pH5.5?(0.1M?PBS)中,室溫下,向其中加入 0.05g熒光素,反應(yīng)12小時(shí)后,使用透析方法(MW=300Da)除掉未反應(yīng)的熒光素;得熒光素標(biāo)記的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白。經(jīng)冷凍干燥后,得成品熒光素標(biāo)記的III型類人源蛋白。 [0076] 取0.1g制備的熒光素標(biāo)記的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白蛋白溶于5mL水溶液中,得熒光素標(biāo)記的III型類人源膠原蛋白產(chǎn)品B。 [0077] 取0.1g制備的熒光素標(biāo)記的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白溶于含有1%?CSNPs(實(shí)施例 1制備的脫乙酰殼多糖衍生物)的5mL水溶液中,得熒光素標(biāo)記的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白產(chǎn)品C。 [0078] 取0.1g制備的熒光素標(biāo)記的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白溶于含有1%CMCS(羧甲基殼多糖)的5mL水溶液中,得熒光素標(biāo)記的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白產(chǎn)品D。 [0079] 取0.1g制備的熒光素標(biāo)記的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白溶于含有1%HPCS(羥丙基殼多糖)的5mL水溶液中,得熒光素標(biāo)記的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白產(chǎn)品E。 [0080] 2、透皮實(shí)驗(yàn):將60只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為六組,每組10只,即對(duì)照組,A,B,C,D,E每只小鼠用電動(dòng)剃須刀去掉2塊5*5cm的毛,露出皮膚,然后在上述脫毛的2塊皮膚上分別涂抹0.5mL制備的空白溶液(超純水,對(duì)照),A,B,C,D,E。經(jīng)八小時(shí)后,麻醉處死小鼠后,取涂抹空白溶液(超純水,對(duì)照),A,B,C,D,E的皮膚,常規(guī)制備石蠟切片,進(jìn)行熒光成像,如圖4所示。 [0081] 3、熒光定量統(tǒng)計(jì)方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。冷凍切片直接免疫熒光染色方法的判讀結(jié)果比較采用x2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果如圖5所示。需要說明的是,圖5中,CSNPs表示A中的脫乙酰殼多糖衍生物的吸收量;III?Collagen表示B中的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白的吸收量;III?Collagen@CSNPs?表示C中的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白的吸收量;?III?Collagen@CMCS表示D中的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白的吸收量;?III?Collagen@HPCS表示E中的重組Ⅲ型人源化膠原蛋白的吸收量。 [0082] 4、結(jié)果 [0083] 從圖5可以得出,與重組Ⅲ型人源化膠原蛋白相比,本發(fā)明的脫乙酰殼多糖衍生物可以顯著地促進(jìn)重組Ⅲ型人源化膠原蛋白的經(jīng)皮吸收,兩小時(shí)時(shí)是單體的1.5倍;四小時(shí)后吸收量是單體的4倍。同樣,與羧甲基殼多糖和羥丙基殼多糖相比,其吸收量也有4倍以上的增加。 [0084] 應(yīng)用例2:1、樣品制備:配制含1%?CSNPs(實(shí)施例1制備的脫乙酰殼多糖衍生物)的 5mL水溶液A(CS)。 [0085] 取1g?纖連蛋白溶于?pH5.5?(0.1M?PBS)中,室溫下,向其中加入0.05g熒光素,反應(yīng)12小時(shí)后,使用透析方法(MW=300Da)除掉未反應(yīng)的熒光素;得熒光素標(biāo)記的纖連蛋白。經(jīng)冷凍干燥后,得成品熒光素標(biāo)記的纖連蛋白。 [0086] 取0.1g制備的熒光素標(biāo)記的纖連蛋白溶于5mL水溶液中,得熒光素標(biāo)記的纖連蛋白B(FN)。 [0087] 取0.1g制備的熒光素標(biāo)記的纖連蛋白溶于含有1%?CSNPs(實(shí)施例1制備的脫乙酰殼多糖衍生物)的5mL水溶液中,得熒光素標(biāo)記的纖連蛋白產(chǎn)品C(CS@FN)。

權(quán)利要求

1.一種蛋白組合物,包括脫乙酰殼多糖衍生物和蛋白,
所述脫乙酰殼多糖衍生物包括:(1)脫乙酰殼多糖主鏈;(2)與所述主鏈通過醚鍵連接的基團(tuán)A;以及(3)與所述主鏈通過酰胺鍵連接的基團(tuán)B,其中,所述基團(tuán)A具有一個(gè)或多個(gè)羥乙基,所述基團(tuán)B具有一個(gè)或多個(gè)?;鸵粋€(gè)或多個(gè)氨基;
所述脫乙酰殼多糖衍生物具有如下結(jié)構(gòu)單元1、2中的至少一種:
其中,結(jié)構(gòu)單元1、2中,A表示所述基團(tuán)A,
B表示所述基團(tuán)B;
所述基團(tuán)A具有如下結(jié)構(gòu):
,m為1?100;
所述基團(tuán)B是 ;
所述脫乙酰殼多糖衍生物和蛋白分子的重量比為1:0.01?10;
所述脫乙酰殼多糖衍生物和所述蛋白形成納米顆粒;
所述蛋白選自纖連蛋白、重組Ⅲ型人源化膠原蛋白中的一種或多種;
所述脫乙酰殼多糖衍生物的平均分子量為500?18000Da。

2.權(quán)利要求1所述的蛋白組合物的制備方法,包括如下步驟:
將脫乙酰殼多糖衍生物溶于溶劑,得到溶液A;
將蛋白溶于溶劑得到溶液B;
將溶液A和溶液B進(jìn)行混合。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,
所述溶劑為水;
所述溶液A中脫乙酰殼多糖衍生物的質(zhì)量濃度0.001%?50%;
所述溶液B中蛋白的質(zhì)量濃度為0.001%?50%;
所述混合的條件包括:攪拌速度為10?2000?rpm,攪拌時(shí)間為0.1?48h。

4.一種護(hù)膚品,包括權(quán)利要求1所述的蛋白組合物。
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