蒽環(huán)霉素-抗體偶聯(lián)物 發(fā)明領(lǐng)域 [0001] 本發(fā)明涉及具有導(dǎo)向于各種抗原能力的治療性偶聯(lián)物(conjugate)。所述偶聯(lián)物包含導(dǎo)向部分和化學(xué)治療藥物。導(dǎo)向部分和化學(xué)治療藥物通過含有細(xì)胞內(nèi)可裂解部分的接頭連接。 [0002] 發(fā)明背景 [0003] 很多年來，能用于向人類癌癥特異性送遞化療藥物的抗體一直是特異性導(dǎo)向的藥物治療領(lǐng)域的科學(xué)家們的一個目標(biāo)。這個目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)最終可以給癌癥化學(xué)療法帶來魔力彈這個概念。朝著這個目標(biāo)的顯著進(jìn)展隨著1975年Kohler和Milstein的雜交瘤技術(shù)的出現(xiàn)，以及接之而來的制備單克隆抗體(mAbs)的能力而發(fā)展。在過去25年間，已經(jīng)制備出抗癌細(xì)胞上過量表達(dá)的很多抗原靶的mAbs。針對藥物、毒素、放射性核素或其他治療劑本身，或者它們的偶聯(lián)物，已經(jīng)臨床前，并且隨后臨床上試驗(yàn)了很多mAbs。一般情況下，mAbs本身，經(jīng)常稱作“裸mAbs”，對于患有實(shí)體腫瘤的患者以長期存活標(biāo)準(zhǔn)看還沒有成功，雖然最近用抗乳腺和結(jié)腸癌的mAb治療已經(jīng)看到存活優(yōu)勢(分別抗HER2-neu和17-1A的mAbs)。對于血液惡性腫瘤，使用裸mAbs，特別是抗B-細(xì)胞淋巴瘤(抗B-細(xì)胞表面上CD20和CD22的mAbs)實(shí)現(xiàn)更大程度成功。 [0004] 然而，顯然，使用腫瘤-相關(guān)mAbs和合適的毒性劑的偶聯(lián)物比抗大多數(shù)臨床癌癥病例的裸mAbs更有效。這里，mAb還載有對于病變組織是特異性的毒性劑，除了毒性之外，其本身固有mAb的Fc部分提供的天然或重組工程效應(yīng)物功能，例如補(bǔ)體固定和ADCC(抗體依賴細(xì)胞毒性)，其設(shè)置作用機(jī)理導(dǎo)致細(xì)胞溶解作用。然而，有可能Fc部分對于治療功能不是必需的，在mAb片段情況下，其他機(jī)理，例如細(xì)胞凋亡，抑制血管生成，抑制轉(zhuǎn)移活性，和/或影響腫瘤細(xì)胞粘附，可能起作用。毒性劑最常是化療藥物，發(fā)射粒子的放射性核素，或者細(xì)菌或植物毒素。各種偶聯(lián)物類型有著它自己特定優(yōu)點(diǎn)。穿透性放射性核素和細(xì)菌和植物毒素是十分有毒的，其毒性通常比標(biāo)準(zhǔn)化療藥物高 幾個數(shù)量級。這使得前兩者可以與mAbs一起使用，因?yàn)樵谂R床情形中，攝入到疾病組織中的mAbs量非常低。臨床實(shí)踐中低的mAb腫瘤攝入和癌癥化療藥物相對低毒性譜的聯(lián)合，是為什么mAb-藥物偶聯(lián)物迄今為止不能做到承諾的主要原因。 [0005] 在為研究人癌癥而建立的臨床前動物異種移植模型中，描述過能競爭性消退甚至治愈動物腫瘤的很多mAb偶聯(lián)物。然而，在很多這樣的動物異種移植模型中，腫瘤攝入mAb偶聯(lián)物經(jīng)常是每克組織10-50％注射劑量，而在臨床情形下，每克組織腫瘤攝入 0.1-0.0001％注射劑量更正常。意料之中的是用更具有毒性的放射性核素和毒素制備的mAb偶聯(lián)物臨床上一般比用標(biāo)準(zhǔn)化療藥物制備的相應(yīng)的mAb-藥物偶聯(lián)物遠(yuǎn)遠(yuǎn)要好。然而，放射性核素mAb偶聯(lián)物由于與腫瘤定位活性相比大大過量的循環(huán)的衰變的放射性的存在經(jīng)常能產(chǎn)生大的毒性。毒素-mAb偶聯(lián)物有著雙重缺點(diǎn)：大的非靶組織損傷和大的對一般使用的植物或細(xì)菌蛋白質(zhì)的免疫反應(yīng)性。而現(xiàn)在能制備人或人源化形式的(互補(bǔ)決定區(qū)移植的)mAbs，任何偶聯(lián)物的毒性部分的去免疫作用可能顯著阻礙進(jìn)步。 [0006] 雖然目前可看到臨床研究中沒有必然的效力，但是mAb-藥物偶聯(lián)物仍然具有令人感興趣的理論優(yōu)點(diǎn)。藥物本身結(jié)構(gòu)是完全確定的，不以異構(gòu)體存在，并且通常在遠(yuǎn)離mAbs的抗原結(jié)合區(qū)的特定位點(diǎn)的非常確定的偶聯(lián)化學(xué)，可以與mAb蛋白連接。與涉及Abs和毒素的化學(xué)偶聯(lián)物相比，MAb-藥物偶聯(lián)物制備更具有可重復(fù)性，因此更有商業(yè)發(fā)展前途并且容易獲得管理批準(zhǔn)。因?yàn)檫@樣的原因，盡管碰到挫折，但是對mAb藥物偶聯(lián)物的興趣持續(xù)不斷。但是，在最近的一些情況下，臨床前結(jié)果已經(jīng)相當(dāng)有希望。在偶聯(lián)化學(xué)中繼續(xù)精益求精，最新考慮了去除或減少mAb的免疫原性質(zhì)的能力，考慮到有用的mAb-藥物偶聯(lián)物對于臨床癌癥治療的難以捉摸的前景。 [0007] 對mAb-藥物偶聯(lián)物的相關(guān)早期工作發(fā)現(xiàn)，在使用化學(xué)鍵的體外和體內(nèi)臨床前試驗(yàn)期間經(jīng)常導(dǎo)致藥物效力的損失。因此，很多年以前就認(rèn)識到，理想地，一旦通過mAb成分被靶細(xì)胞內(nèi)化，為了成為有用的治療，藥物需要以它原來的形式釋放。然后上世紀(jì)八十年代和九十年代早期焦點(diǎn)大都集中在藥物和mAb之間化學(xué)接頭的性質(zhì)上。尤其是，根據(jù)腫瘤中的pH經(jīng)常低于正常生理pH的發(fā)現(xiàn)，開發(fā)了使用溫和的 酸可裂解的接頭制備的偶聯(lián)物(美國專利Nos.4,542,225；4,569,789；4,618,492；和4,952,394)。這項(xiàng)研究在Trail等的劃時代文章中達(dá)到頂峰(Science 261：212-215(1993))，這篇文章證明，臨床前研究中，用合適的接頭制備的mAb-阿霉素(DOX)偶聯(lián)體能用來治愈攜帶各種人腫瘤異種移植物的小鼠。

1.蒽環(huán)霉素藥物和抗體的偶聯(lián)物，其中所述蒽環(huán)霉素藥物和所述抗體通過包含酰肼和馬來酰亞胺的接頭連接，并且所述抗體是針對CD74的內(nèi)化抗體，并且其中所述抗體-蒽環(huán)霉素偶聯(lián)物內(nèi)化到靶細(xì)胞中，并且其中所述蒽環(huán)霉素藥物選自柔紅霉素，阿霉素，表柔比星，2-吡咯啉阿霉素，嗎啉代-阿霉素，和氰基嗎啉代-阿霉素。 2.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中所述偶聯(lián)物導(dǎo)向于乳腺癌、黑素瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、結(jié)腸癌或前列腺癌。 3.權(quán)利要求2的偶聯(lián)物，其中所述偶聯(lián)物導(dǎo)向于B細(xì)胞淋巴瘤。 4.權(quán)利要求2的偶聯(lián)物，其中所述偶聯(lián)物導(dǎo)向于黑素瘤。 5.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中所述抗體是LL1。 6.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中所述接頭連接抗體上的還原的二硫鍵。 7.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中所述蒽環(huán)霉素藥物通過13-酮基部分與抗體連接。 8.權(quán)利要求6的偶聯(lián)物，其中所述還原的二硫鍵是抗體上的鏈間二硫鍵。 9.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中所述抗體是鼠抗體，嵌合抗體，靈長動物化抗體，人源化抗體，或人抗體。 10.權(quán)利要求9的偶聯(lián)物，其中所述抗體是I gG的片段。 11.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中每分子抗體有6-10個蒽環(huán)霉素藥物分子。 12.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中抗體-蒽環(huán)霉素偶聯(lián)物內(nèi)化到靶細(xì)胞中，并且隨后在細(xì)胞表面上表達(dá)抗原。 13.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中抗體總的電荷沒有改變。 14.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中蒽環(huán)霉素藥物帶有烷基化部分。 15.權(quán)利要求14的偶聯(lián)物，其中烷基化部分是烯胺。 16.權(quán)利要求15的偶聯(lián)物，其中蒽環(huán)霉素藥物是2-吡咯啉基-阿霉素。 17.制備權(quán)利要求1的偶聯(lián)物的方法，其中接頭首先與蒽環(huán)霉素藥物偶聯(lián)，從而產(chǎn)生蒽環(huán)霉素藥物-接頭偶聯(lián)物，并且其中所述蒽環(huán)霉素藥物-接頭偶聯(lián)物接著偶聯(lián)硫醇-還原的單克隆抗體或抗體片段。 18.權(quán)利要求17的方法，其中在與硫醇-還原的單克隆抗體或抗體片段偶聯(lián)之前不純化蒽環(huán)霉素藥物-接頭偶聯(lián)物。 19.權(quán)利要求17的方法，其中蒽環(huán)霉素藥物上第二個反應(yīng)性官能不受破壞。 20.權(quán)利要求17的方法，其中蒽環(huán)霉素藥物上的烷基化基團(tuán)不受破壞。 21.權(quán)利要求17的方法，其中所述蒽環(huán)霉素藥物是2-吡咯啉基-阿霉素，嗎啉代-阿霉素，或氰基嗎啉代-阿霉素。 22.權(quán)利要求1的抗體和蒽環(huán)霉素藥物的偶聯(lián)物在制備用于治療哺乳動物中的乳腺癌、黑素瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、結(jié)腸癌或前列腺癌的藥物中的用途。