使用在被導(dǎo)向的腫瘤細(xì)胞上有非常大量的受體的抗體(稱作BR96)實(shí)現(xiàn)這個(gè)有希望的結(jié)果，mAb-藥物偶聯(lián)物被高度取代(每個(gè)mAb單位6-8個(gè)DOX殘基)，以反復(fù)為基礎(chǔ)，以大劑量施用偶聯(lián)物。 [0008] 在臨床情形中，腫瘤對mAbs的攝入非常低，因?yàn)檫@個(gè)變量在某種程度上是尋址的更有毒性的藥物，需要實(shí)現(xiàn)期望的治療效果。在幾種不同的mAb-藥物偶聯(lián)物的開發(fā)中使用更有毒性的藥物(美國專利Nos.5,208,020；5,416,064；5,877,296；和6,015,562)。這些努力使用藥物，例如maytansinoids和calicheamicin的衍生物，它們本質(zhì)上太有毒性不能在標(biāo)準(zhǔn)化療中使用。與mAb的偶聯(lián)使得相對于單獨(dú)化療可見到的經(jīng)常是非特異性的細(xì)胞和蛋白質(zhì)結(jié)合，相對更多的藥物被導(dǎo)向于腫瘤。由于腫瘤靶上通?？梢姷牡退娇乖Y(jié)合位點(diǎn)，象這些的藥物的敏銳毒性可能會克服臨床上見到的腫瘤-定向的mAb的低水平。在臨床前研究中，在比先前用標(biāo)準(zhǔn)藥物例如DOX，用mAb-藥物偶聯(lián)物見到的相比低得多的mAb-藥物偶聯(lián)物劑量，見到攜帶人腫瘤異種移植物的小鼠的治愈(Liu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93：8616-8623(1996)和Hinman等，Cancer Res.53：3336-3342(1993))。在maytansinoid-mAb偶聯(lián)物情況下(Liu)，治療所需要的偶聯(lián)物的量比以前用DOX偶聯(lián)物(Trail，上文)需要的少50倍以上。 [0009] 在這些偶聯(lián)物的開發(fā)中，認(rèn)為藥物和mAb之間的接頭對于體外和體內(nèi)保留好的抗腫瘤活性是決定性的。用分子內(nèi)可裂解部分(腙)和藥物和mAb之間的易發(fā)生還原的鍵(二硫鍵)制備所述偶聯(lián)物。體內(nèi)血清條件下腙鍵顯然是穩(wěn)定的，發(fā)現(xiàn)二硫鍵對于實(shí)際使用通常不足夠穩(wěn)定。在calicheamicins情況下，以位阻大的(成對二甲基)二硫鍵置換標(biāo)準(zhǔn)二硫鍵而制備偶聯(lián)物，或者在maytansinoids情況下用甲基二硫鍵置換標(biāo)準(zhǔn)二硫鍵而制備偶聯(lián)物。進(jìn)行這項(xiàng)工作時(shí)，對較新的蒽環(huán)霉素-取代的mAb偶聯(lián)物繼續(xù)分離工作。在較新的DOX偶聯(lián)mAbs情況下，發(fā)現(xiàn)通過僅插入腙作為可裂解單元，并且通過硫醚鍵而不是 二硫鍵連接DOX和mAb，獲得卓越結(jié)果(美國專利No.5,708,146)。當(dāng)以相同的方式連接時(shí)，還使用能使每個(gè)Mab取代位點(diǎn)DOX單元數(shù)目加倍的支化接頭，獲得新的DOX-Mab偶聯(lián)物效力增加近一個(gè)數(shù)量級(King等，Bioconjugate Chem.10：279-288，(1999))。 [0010] 發(fā)明概述 [0011] 本發(fā)明涉及蒽環(huán)霉素藥物的新的內(nèi)化抗體偶聯(lián)物。具體實(shí)施方案舉例來說是阿霉素(DOX)，表柔比星，嗎啉代阿霉素(嗎啉代-DOX)，氰基嗎啉代-阿霉素(氰基嗎啉代-DOX)，和2-吡咯啉基(pyrrolino)-阿霉素(2-PDOX)的偶聯(lián)物。2-PDOX是特別有毒的，其結(jié)構(gòu)中插入烯胺，其不僅作為嵌入劑和拓?fù)洚悩?gòu)酶起作用，而且還作為具有增加的毒性的烷化劑。和DOX一樣，2-PDOX具有相對好的水溶性，這意味著其能以多取代量偶聯(lián)mAbs而不沉淀mAb。下面詳細(xì)描述的藥物始終以每mAb分子8個(gè)藥物部分的平均水平(典型地測得7-9)被取代。但是藥物的數(shù)目也可以是每mAb分子6-10個(gè)分子之間的范圍。 [0012] 一方面，本發(fā)明涉及一種免疫偶聯(lián)物，包括導(dǎo)向部分，蒽環(huán)霉素藥物，和通過巰基結(jié)合導(dǎo)向部分并且通過分子內(nèi)可裂解部分結(jié)合蒽環(huán)霉素化療藥物的接頭。 [0013] 在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，導(dǎo)向部分是mAb，蒽環(huán)霉素化療藥物是DOX，2-PDOX，嗎啉代-DOX和嗎啉代氰基-DOX，并且分子內(nèi)可裂解部分是腙。 [0014] 另一方面，本發(fā)明涉及一種免疫偶聯(lián)物，包括導(dǎo)向于疾病的抗體和蒽環(huán)霉素化療藥物。近30-40年左右已經(jīng)合成幾百種蒽環(huán)霉素藥物例子，在別處對它們進(jìn)行了詳細(xì)討論(參見：AnthracyclineAntibiotics；New Analogs，methods of Delivery，and Mechanismsof Action，Waldemar Priebe，Editor，ACS Symposium Series 574，American Chemical Society，Washington DC，1994)。認(rèn)為這樣的類似物在本發(fā)明的范圍內(nèi)。 [0015] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種免疫偶聯(lián)物，包括導(dǎo)向于疾病的抗體和式I和II的蒽環(huán)霉素化療藥物： [0016]

23.權(quán)利要求22的用途，其中所述藥物用于治療B細(xì)胞淋巴瘤。 24.權(quán)利要求22的用途，其中所述哺乳動物是人。 25.權(quán)利要求22的用途，其中所述藥物是靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，動脈內(nèi)，鞘內(nèi)，膀胱內(nèi)或腫瘤內(nèi)制劑。 26.權(quán)利要求22的用途，其中所述藥物是藥團(tuán)或輸液制劑。 27.權(quán)利要求22的用途，其中藥物是用于反復(fù)和/或周期為基礎(chǔ)的給藥的制劑。 28.權(quán)利要求22的用途，其中哺乳動物患有黑素瘤。 29.權(quán)利要求22-28任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物與其他標(biāo)準(zhǔn)治療法聯(lián)合。 30.權(quán)利要求29的用途，其中所述標(biāo)準(zhǔn)治療法選自放射療法，手術(shù)和化學(xué)療法。 31.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中所述抗體是單克隆抗體。 32.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中所述抗體是抗體片段。 33.權(quán)利要求1的偶聯(lián)物，其中所述抗體是抗體融合蛋白。 34.權(quán)利要求33的偶聯(lián)物，其中所述抗體融合蛋白是多價(jià)的。 35.一種在合適的容器中含有權(quán)利要求1的單克隆抗體和蒽環(huán)霉素藥物的偶聯(lián)物的試劑盒。 36.權(quán)利要求35的試劑盒，其中在無菌容器中提供液體，冷凍或凍干形式的單克隆抗體-蒽環(huán)霉素藥物偶聯(lián)物。 37.權(quán)利要求36的試劑盒，其中單克隆抗體-蒽環(huán)霉素藥物偶聯(lián)物被稀釋或重新配制。