[0029] 圖1是利用描述的方法制備的蒽環(huán)霉素-抗體偶聯(lián)物的代表性大小排阻HPLC譜圖。 [0030] 圖2詳細(xì)描述1微克/毫升藥物-mAb偶聯(lián)物濃度的抗Burkitt淋巴瘤Raji細(xì)胞的DOX-LL1偶聯(lián)物與非導(dǎo)向性MN-14抗體的DOX偶聯(lián)物相比的體外效力。DOX-LL1偶聯(lián)物與DOX-MN-14偶聯(lián)物相比，表現(xiàn)出存活細(xì)胞級(jí)分中三個(gè)數(shù)量級(jí)的差異。 [0031] 圖3詳細(xì)說(shuō)明裸鼠DU145前列腺異種移植物模型中單一100微克劑量的 2-PDOX-RS7偶聯(lián)物的效力。 [0032] 圖4詳細(xì)說(shuō)明侵襲性RAJI/SCID小鼠全身腫瘤模型中單一劑量的LL1抗體的 2-PDOX-和DOX-偶聯(lián)物的效力。對(duì)動(dòng)物i.v.注射Raji B-細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，并且五天后用圖中指定的偶聯(lián)物治療。 [0033] 圖5詳細(xì)說(shuō)明侵襲性RAJI/SCID小鼠全身腫瘤模型中單一劑量的2-PDOX-LL1抗體與不施用偶聯(lián)物的未處理對(duì)照或者給與非導(dǎo)向性對(duì)照偶聯(lián)物2-PDOX-MN-14的動(dòng)物組相比的效力。 [0034] 優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述 [0035] 除非另有說(shuō)明，如這里使用的，“一個(gè)”意思是“一個(gè)或多個(gè)”。 [0036] 導(dǎo)論 [0037] 化療藥物，例如上面討論的那些，能通過(guò)幾種方法與抗體偶聯(lián)，形成mAb-藥物偶聯(lián)物。例如，化療藥物可以在還原mAb鏈間二硫鍵之后與mAb，或其片段連接。這種方法產(chǎn)生每個(gè)抗體分子平均8-10個(gè)(取決于IgG類型)游離巰基，并且以在還原反應(yīng)中使用的硫醇的有限水平以可重復(fù)方式這樣做。這種化療藥物的連接方法是有利的，由于下面的原因： 首先，在親水性賴氨酸殘基上沒(méi)有暴露的mAb或其片段上內(nèi)部或半內(nèi)部位點(diǎn)中放置連接的化療藥物。由于mAb的放置了化療藥物的更多的疏水性區(qū)域而使它們保持更穩(wěn)定。第二，這樣的位點(diǎn)不改變mAb或其片段的總電荷。第三，當(dāng)使用mAb裸形式時(shí)，內(nèi)部硫醇的放置較不可能干擾特別重要的ADCC和補(bǔ)體作用。因此，選擇不 干擾的連接位點(diǎn)，使得ADCC和補(bǔ)體固定，能與mAbs，或mAb片段互補(bǔ)，起藥物送遞載體作用。第四，與暴露的賴氨酸基團(tuán)上放置多個(gè)化療藥物分子相比，內(nèi)部硫醇位置的放置較不可能導(dǎo)致對(duì)化療藥物的免疫反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，與偶聯(lián)前抗體電荷相比，Ab-藥物偶聯(lián)物中抗體的總電荷不改變。這是因?yàn)樵谂悸?lián)反應(yīng)中沒(méi)有利用賴氨酸殘基，因此，沒(méi)有游離的帶正電荷的氨基被修飾形成例如中性酰胺鍵。 [0038] 抗體 [0039] 如這里描述的，抗體指全長(zhǎng)(即，天然存在的或者正常免疫球蛋白基因片段重組方法形成的)免疫球蛋白分子(例如，IgG抗體)或免疫球蛋白分子的免疫活性(即，特異性結(jié)合)部分，象抗體片段。 [0040] 抗體片段是抗體的一部分，例如F(ab′)2，F(xiàn)(ab)2，F(xiàn)ab′，F(xiàn)ab，F(xiàn)v，scFv(單鏈Fv)等。不考慮結(jié)構(gòu)，抗體片段結(jié)合完整抗體識(shí)別的相同的抗原，因此，它是抗體的一部分的抗原結(jié)合片段。 [0041] 術(shù)語(yǔ)“抗體片段”還包括通過(guò)與特異抗原結(jié)合形成復(fù)合體的象抗體一樣作用的任何合成的或基因工程蛋白質(zhì)。例如，抗體片段包括可變區(qū)構(gòu)成的分離的片段，例如由重鏈和輕鏈可變區(qū)構(gòu)成的“Fy”片段，其中重鏈和輕鏈可變區(qū)通過(guò)肽接頭連接的重組單鏈多肽分子(“scFv蛋白質(zhì)”)，和由模擬超變區(qū)的氨基酸殘基構(gòu)成的最小識(shí)別單位?？梢砸圆煌椒?gòu)建Fv片段，得到多價(jià)和/或多特異性結(jié)合形式。多價(jià)結(jié)合形式與抗特異性表位的一個(gè)以上結(jié)合位點(diǎn)反應(yīng)，而多特異形式與一個(gè)以上表位(抗原的或甚至抗特異性抗原和不同抗原)結(jié)合。 [0042] 根據(jù)這里討論的，術(shù)語(yǔ)抗體融合蛋白是重組產(chǎn)生的抗原-結(jié)合分子，其中具有相同或不同特異性的相同或不同天然抗體，單鏈抗體或抗體片段中的兩個(gè)或多個(gè)被連接。融合蛋白至少包括一個(gè)特異性結(jié)合位點(diǎn)。 [0043] 融合蛋白的價(jià)指融合蛋白具有抗原或表位結(jié)合臂或位點(diǎn)的總數(shù)；即單價(jià)，二價(jià)，三價(jià)或多價(jià)?？贵w融合蛋白的多價(jià)意思是它利用了與抗原結(jié)合中多個(gè)相互作用的優(yōu)點(diǎn)，從而提高了與抗原結(jié)合或與不同抗原結(jié)合的親合力。特異性指抗體融合蛋白能結(jié)合多少不同類型的抗原或表位；即單特異性，二特異性，三特異性或多特異性。使用這些定義，天然抗體，例如IgG，是二價(jià)的，因?yàn)樗哂袃蓚€(gè)結(jié)合臂，但是是單特異性的，因?yàn)樗Y(jié)合一種類型的抗原或表位。單特異性多價(jià)融 合蛋白對(duì)于相同的抗原或表位有一個(gè)以上結(jié)合位點(diǎn)。例如，單特異性二價(jià)抗體是具有與相同抗原反應(yīng)的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的融合蛋白。融合蛋白可以包括不同抗體成分或相同抗體成分的多個(gè)拷貝的多價(jià)或多特異性組合。